瓶裝葡萄酒中酵母菌的檢查方法
葡萄酒在瓶裝時,必須認真考慮葡萄酒是否已經達到了除菌、滅菌的目的。為了準確達到這個目的,就要對瓶裝的葡萄酒進行快速而可靠的檢驗。這里列舉了3個檢查方法,僅供同行朋友們在實際生產中,根據企業的實際條件進行參考。
一、格森海姆(Geisenheimer)檢定法
將被檢驗的葡萄酒在無菌的條件下,接入與其等量的葡萄汁,便為酵母提供了良好的繁殖條件,酵母開始快速繁殖和發酵。酵母繁殖的速度和發酵的強度,是衡量被檢樣品染菌的程度。
具體操作如下:
取標準試管3支,分別注入10mL葡萄汁,并加棉塞封口,置于高壓滅菌鍋中滅菌;將吸管用紙包好,并在160℃下滅菌。然后小心的拔除葡萄酒瓶的軟木塞,立即用火焰將瓶口附著的微生物滅除,再用無菌吸管從瓶底吸出10mL被檢葡萄酒,移入已滅菌葡萄汁的試管內,每份樣品做平行樣3支。
若被檢的樣品活酵母較多,在3—5天內即可檢定其發酵度;若酵母較少,發酵需要兩倍于此的時間,由此可斷定生產線是否處于受控狀態,斷定瓶裝酒出廠后是否會發生渾濁等質量事故。
這個方法十分簡便,不需要特別的儀器,對小型葡萄酒廠十分適用,這是其優點。缺點是只能檢定出葡萄酒中是否存在酵母菌,無法進行定量分析。
二、薄膜過濾法
借助于不同孔徑的過濾片(孔徑一般為2微米以下),在無菌條件下過濾被檢葡萄酒,分離出酵母及其它微生物,然后對濾片上的微生物進行生長培養,計算出現的菌落數,并進行其它各項必要的檢查。
操作方法如下:
將所有參與過濾的儀器、器皿進行徹底消毒,在無菌的條件下進行過濾等操作。在每次分析之前,將過濾器及過濾片置于高壓鍋內滅菌,用經火焰燒過的鑷子取已滅菌的過濾片放入過濾器中。
被檢瓶酒在開啟前,必須仔細用75%酒精擦拭瓶口,小心地拔除軟木塞,勿使開瓶刀穿通軟木塞。
開始時先將軟木塞拔出四分之三,然后用手輕輕取下軟木塞,瓶口在倒酒前先用火焰燒一下,再將葡萄酒一點一點地倒入過濾漏斗中。
過濾結束后,用火焰燒過的鑷子在漏斗內取出濾片,置于培養皿中,并擺放平整,倒入適量的酵母培養基(約3mL),然后標明日期和試樣編號,置于生物培養箱內,在25℃下培養3—5天。為避免凝結水影響菌落生長,將培養皿反扣于培養箱內。若過濾片上的酵母菌是活的,酵母即進行繁殖,在培養基上會出現菌落。
如果未發現菌落生長,說明被檢的葡萄酒是穩定的,不會出現酵母菌引起的渾濁;如果每瓶樣有5個以上的菌落出現,說明葡萄酒的除菌或殺菌操作不徹底,葡萄酒有不穩定的因素,應該嚴格檢查生產過程中的每個環節,直到查出原因為止。
這一方法能對瓶裝酒內各種微生物進行定量檢定,但需要選擇適當孔徑的濾片和培養基,并由掌握基本微生物學的熟練人員操作。
三、快速檢定法
薄膜過濾法可以用顯微鏡對濾片做仔細檢查,迅速檢出活酵母;快速檢定法則可將死的和活的微生物區別開來,但要求瓶裝酒內必須不含其他懸浮物。
在適宜的溫度下,于8—14小時內,具有繁殖能力的菌體生長成為微小的菌落,用顯微鏡觀察,可將死的、沒有繁殖能力的菌落區別開來。活菌體在培養時會形成小的菌落,死菌體只有單個的存在。
