1 微生物檢驗技術(shù)

    　1.1 無菌室

    　1.1.1 無菌室標(biāo)準(zhǔn)

    　無菌度：10000級；溫度：20℃－25℃；濕度：＜60%；壓力：0.5Pa，正壓，＜1.5Pa。

    　1.1.2 無菌室管理

    　（1）微生物操作人員必須具有嚴格的無菌意識；

    　（2）操作人員要換上無菌室專用的工作服、鞋、帽、口罩，經(jīng)風(fēng)淋門進入；

    　（3）無菌室內(nèi)始終保持正壓，防止外界空氣進入；

    　（4）外人不得進入無菌室，不用的物品應(yīng)及時拿出；

    　（5）定期開紫外燈殺菌，休假日，紫外燈不關(guān)；

    　（6）每周做一次空間衛(wèi)生檢查；

    　（7）每天工作之前和結(jié)束后，清掃無菌室。

    　1.1.3 培養(yǎng)基

    　1.1.3.1 培養(yǎng)基類型

    　（1）麥汁瓊脂培養(yǎng)基：檢出酵母；

    　（2）營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：檢出一般細菌；

    　（3）NBB（NBB－A、NBB－B、NBB－C）培養(yǎng)基：檢查啤酒有害菌。

    　1.1.3.2 培養(yǎng)方法

    　（1）一般細菌使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度37℃，有氧培養(yǎng)24小時；

    　（2）酵母使用麥汁瓊脂培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度25℃－28℃，有氧培養(yǎng)48小時；

    　（3）厭氧菌使用NBB培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度25℃－28℃，厭氧平板培養(yǎng)5天－7天，或液體培養(yǎng)1星期
－2星期。

    　1.1.3.3 結(jié)果鑒定

    　（1）鏡檢：液體培養(yǎng)基中觀察混濁沉淀的產(chǎn)生，固體培養(yǎng)基上觀察菌落的形成；

    　（2）產(chǎn)酸情況的觀察：若細菌產(chǎn)酸，則培養(yǎng)基的pH值在培養(yǎng)后會發(fā)生變化；

    　（3）聞氣味：有些有害菌的代謝產(chǎn)物具有特殊氣味，可根據(jù)培養(yǎng)后的氣味幫助鑒定；

    　（4）革蘭氏染色：用KOH實驗法判定菌落的革蘭氏陽性和陰性；

    　（5）過氧化氫酶實驗：將純菌落涂到干燥的載玻片上，滴一滴3%過氧化氫液，好氧菌和兼性好氧菌含有過氧化氫酶，能分解過氧化氫：

     　　　過氧化氫酶
   　 2H2O2————→2H2O＋O2

    　逸出的氧氣形成氣泡，顯示對過氧化氫酶實驗陽性；厭氧菌和兼性厭氧菌不能起反應(yīng)，為過氧化氫酶實驗陰性。

    　1.1.4 對大腸桿菌的檢測：大腸桿菌對啤酒廠來說是最嚴重的污染元素，因此，日常檢測非常重要。下面，就是我公司的檢測步驟：

    　1.1.4.1 設(shè)備和材料

    　溫箱：36±1℃；水浴：44±0.5℃；天平；顯微鏡；均質(zhì)器或乳體；溫度計；平皿；試管；吸管；載玻片。

    　1.1.4.2 培養(yǎng)基及乳體

    　乳糖膽鹽發(fā)酵管；伊紅美藍發(fā)酵管；乳糖發(fā)酵管；蛋白胨水；革蘭氏染色液；靛基質(zhì)試劑。

    　1.1.4.3 大腸菌群檢驗程序（表1）

    　1.1.4.4 操作步驟

    　（1）檢樣稀釋

    　①以無菌操作將檢樣25mL（或25g）放于含有225mL滅菌生理鹽水，或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠），或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分震蕩或研磨，做成1∶10的均勻稀釋液。

 　②用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL，注入含有9mL生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1∶100的稀釋液。
 
   　③另取1mL滅菌吸管，按上項操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。

    　④根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇3個稀釋度，每個稀釋度接種3管。

    　（2）乳糖發(fā)酵實驗

    　將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管；1mL及以下者，用單料乳糖發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置36±1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2h，如果所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進行。

    　（3）分離培養(yǎng)

    　將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18h—24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實實驗。

    　（4）證實實驗

　在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1個—2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36±1℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣，革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌，即可報告為大腸菌群陰性。

    　（5）報告

    　根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報告每100mL（g）大腸菌群的最可能數(shù)。

    　1.2 加強微生物檢測操作人員的培訓(xùn)

    　（1）強化微生物檢測人員的無菌意識；

    　（2）提高微生物檢測人員的操作技能；

    　（3）微生物檢測人員一定要注意個人衛(wèi)生；

    　（4）個人物品不準(zhǔn)隨便放于無菌室內(nèi)；

    　（5）上班后，立即更換工作服，不穿工作服不準(zhǔn)進入無菌室；

    　（6）取樣要準(zhǔn)確，確保取樣過程的無菌操作；

    　（7）加強無菌操作，杜絕因操作有誤引起的菌檢不合格；

    　（8）嚴格執(zhí)行無菌室的殺菌程序，定期開紫外燈殺菌；

    　（9）加強學(xué)習(xí)，充分利用當(dāng)前先進的檢測技術(shù)，爭取在最短檢測時間內(nèi)通知車間。